Obsah
Chromatografické techniky sa vykonávajú vo vedeckých laboratóriách na oddelenie chemických zlúčenín od neznámej vzorky. Vzorka sa rozpustí v rozpúšťadle a tečie cez kolónu, v ktorej sa separuje príťažlivosťou zlúčeniny proti materiálu kolóny. Táto polárna a nepolárna príťažlivosť k materiálu kolóny je aktívna sila, ktorá spôsobuje, že sa zlúčeniny v priebehu času separujú. Dva typy chromatografie, ktoré sa dnes používajú, sú plynová chromatografia (GC) a vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC).
Fáza mobilného operátora
Plynová chromatografia odparuje vzorku a prenáša sa pozdĺž systému inertným plynom, ako je hélium. Použitie vodíka vedie k lepšej separácii a účinnosti, ale veľa laboratórií použitie tohto plynu zakazuje kvôli jeho horľavosti. Pri použití kvapalinovej chromatografie vzorka zostáva v kvapalnom stave a je tlačená cez kolónu pri vysokom tlaku rôznymi rozpúšťadlami, ako je voda, metanol alebo acetonitril. Rôzne koncentrácie každého rozpúšťadla ovplyvňujú chromatografiu každej zlúčeniny odlišne. Ak vzorka zostane v tekutom stave, zvyšuje sa stabilita zlúčeniny.
Typy stĺpcov
Stĺpce plynovej chromatografie majú veľmi malý vnútorný priemer a ich dĺžka sa môže pohybovať od 10 do 45 metrov. Tieto stĺpce na báze oxidu kremičitého sa stočia pozdĺž kruhového kovového rámu a zahrievajú sa na teplotu 250 stupňov Fahrenheita. Kvapalinové chromatografické kolóny sú tiež na báze oxidu kremičitého, ale majú hrubé kovové puzdro, ktoré odoláva vysokému množstvu vnútorného tlaku. Tieto kolóny pracujú pri izbovej teplote a sú v rozsahu od 50 do 250 centimetrov dlhé.
Stabilita zlúčeniny
V plynovej chromatografii sa vzorka vstreknutá do systému odparí pri asi 400 stupňov Celzia pred tým, ako sa prenesie cez kolónu. Zlúčenina musí teda byť schopná odolávať teplu pri vysokých teplotách bez toho, aby sa rozpadla alebo degradovala na inú molekulu. Kvapalinové chromatografické systémy umožňujú vedcovi analyzovať väčšie a menej stabilné zlúčeniny, pretože vzorka nie je vystavená teplu.