Obsah
Izolácia baktérií z pôdy je dôležitým prvým krokom v mnohých mikrobiologických pokusoch. Akonáhle sú izolované, baktérie sa môžu ďalej analyzovať, aby sa určili veci, ako napríklad ich druh a ich funkcia v pôdnom prostredí. Aj malé množstvo pôdy môže obsahovať milióny baktérií, čo vyžaduje izoláciu vzorky pôdy pred izoláciou baktérií zo vzorky.
Odmerajte 100 ml. destilovanej vody v odmernom valci a pridajte ju do sterilnej fľaše.
Odvážte 1 g vzorky pôdy a pridajte ju do fľaše destilovanej vody.Fľašu pevne uzavrite a pretrepte, aby ste roztok dôkladne premiešali.
Označte sterilné skúmavky „10 ^ -3“, „10 ^ -4“, „10 ^ -5“ a „10 ^ -6“. Pridajte do každej skúmavky 9 ml destilovanej vody pomocou jednej z pipiet.
Pomocou novej pipety preneste 1 ml roztoku vo fľaši do skúmavky označenej „10-3“. Skúmavku uzavrite a jemne točte, až kým nie je roztok dobre premiešaný.
Pomocou novej pipety preneste 1 ml roztoku v skúmavke „10 ^ -3“ do skúmavky „10 ^ -4“. Uzavrite skúmavku „10 ^ -4“ a premiešajte ju premiešaním. Opakujte túto metódu, aby sa roztok preniesol z skúmavky „10 ^ -4“ do skúmavky „10 ^ -5“ a potom z skúmavky „10 ^ -5“ do skúmavky „10 ^ -6“.
Do skúmaviek "10 ^ -4", "10 ^ -5" a "10 ^ -6" naložte tri vzorky. Pomocou novej pipety preneste 1 ml roztoku z tuby do Petriho misky. Na platňu sa pridá asi 15 ml živného agaru; potom položte veko na platňu a jemne točte tak, aby agar zakryl spodok platne.
Vytvorte kontrolnú platňu vložením 1 ml destilovanej vody do Petriho misky pomocou novej pipety. Pridať agar; nasaďte veko a krúžte doskou.
Petriho misky nechajte vo zvislej polohe, kým sa agar nezasadí. Potom doštičky prevráťte a inkubujte - buď v inkubátore alebo pri izbovej teplote - iba 24 hodín a až päť dní.
Platne z inkubátora vyberte po požadovanom čase inkubácie. Počítajte bakteriálne kolónie na doštičkách obsahujúcich asi 30 až 300 kolónií. Pomocou trvalej značky označte kolónie, ktoré ste už spočítali, aby sa rovnaké kolónie nezapočítavali dvakrát.
Vydeľte počet kolónií spočítaných riedením - „10 ^ -4“, „10 ^ -5“ alebo „10 ^ -6“ - roztoku pôdy pre každú platňu. Nájdite počet kultivovateľných baktérií v pôvodnom grame pôdy spriemerovaním výsledkov z každej počítateľnej doštičky.