Obsah
Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia je technika laboratórnej analýzy zmesi. Je to účinný typ chromatografie, ktorý na poháňanie vzorky zmesi cez kolónu používa vysokotlakový, nie iba gravitačný systém. Vstrekne sa vzorka, potom pumpa obsahujúca vysoké množstvo tlaku pomôže posunúť vzorku pozdĺž naplnenej kolóny, kde sa rozdelí na jednotlivé komponenty. Táto separácia sa potom analyzuje detektorom, aby sa získali výsledky.
Miesto vpichu
Aby sa vzorka mohla vstreknúť do HPLC, musí sa najprv rozpustiť v polárnom kvapalnom rozpúšťadle, výhodne v rozpúšťadle so známymi HPLC spektrami, aby sa jeho údaje mohli od vzoriek odlíšiť. Kvapalný roztok obsahujúci vzorku sa vloží do prístroja a odošle sa do kolóny. Skutočné umiestnenie miesta vpichu závisí od značky nástrojov. Vo väčšine prípadov je proces vstrekovania automatizovaný, ale v niektorých prípadoch musí laboratórny pracovník vzorku vstreknúť pomocou malej injekčnej ihly.
Komponent čerpadla
Zložka pumpy jednotky HPLC je nevyhnutná, pretože poskytuje tlak, ktorý poháňa vzorku cez kolónu. Intenzita pumpy sa líši, ale výkonná môže vytvárať tlak až 6 000 psi alebo libier na štvorcový palec, ktorý sa aplikuje po vstreknutí vzorky. To umožňuje vzorke prejsť kolónou rýchlejšie a efektívnejšie, než keby prepadla iba pomocou gravitačnej sily.
Opis stĺpca
Zvýšená rýchlosť vzorky, ktorá prešla kolónou pumpou, umožňuje použitie iného typu kolóny, ako sa používa v jednoduchej kvapalinovej chromatografii. Výplňový materiál v kolóne môže mať omnoho menšiu veľkosť častíc, čo zväčšuje povrchovú plochu a preto napomáha interakciám vzorky s kolónou. Väčšina HPLC kolón pracuje na základe polarity. Vzorka sa rozpustí v polárnom rozpúšťadle a kolóna sa skladá z prevažne nepolárnych uhľovodíkov. Polárne časti molekuly vzorky prechádzajú kolónou veľmi rýchlo, pretože primárne interagujú s rozpúšťadlom, zatiaľ čo vzorky nepolárnych zložiek ostávajú v kolóne a tvoria slabé interakcie so zložkami kolóny. Z tohto dôvodu komponenty vzoriek odchádzajú zo stĺpca v poradí od najpolárnejších k najpolárnejších.
Funkcia detektora
Detektory sa tiež líšia v závislosti od typu použitého nástroja HPLC. Väčšina však funguje rovnakým spôsobom. Zdroj ultrafialového žiarenia svieti na oddelených zložkách vzorky pri ich výstupe z kolóny. Väčšina organických zlúčenín absorbuje určité množstvo svetla, takže keď prechádzajú aplikovaným svetelným lúčom, môže detektor zachytiť, koľko svetla je absorbované. Detektor tiež zaznamenáva retenčný čas komponentov na základe poradia, v akom vypadávajú zo stĺpca. Tento výstup sa potom môže analyzovať na základe plochy piku, aby sa stanovila presná povaha zložiek vzorky.