Obsah
- Ako fungujú tlmivé roztoky
- Požiadavky na nárazník
- Výber vhodnej vyrovnávacej pamäte
- Ako zmeniť pH tlmivého roztoku
- Príklady biologických pufrov
V bunkách a živých organizmoch sú tekutiny obklopujúce bunky a vo vnútri buniek udržiavané na konštantnom pH. PH v tomto systéme je často rozhodujúce pre biochemické reakcie vyskytujúce sa v organizme. Na štúdium biologických procesov v laboratóriu vedci používajú pufre na udržanie správneho pH počas experimentu. Mnoho biologických tlmivých roztokov pôvodne opísal Good a kolegovia v roku 1966 a stále sa používajú v laboratóriách dodnes.
Ako fungujú tlmivé roztoky
Pufr je jednoducho roztok obsahujúci slabú kyselinu a jej konjugovanú bázu. Keď sa kyselina pridá do tlmivého roztoku, reaguje s konjugovanou bázou, čím vytvára slabú kyselinu a ťažko ovplyvňuje pH roztoku.
Požiadavky na nárazník
Mnoho charakteristík robí biologický pufer efektívnym. Mali by byť rozpustné vo vode, ale nie rozpustné alebo minimálne rozpustné v organických rozpúšťadlách. Pufr by nemal byť schopný prechádzať bunkovou membránou, pretože by to mohlo ovplyvniť správanie buniek. Pufre by mali byť netoxické, nemali by absorbovať UV žiarenie a mali by zostať inertné a stabilné počas celého experimentálneho procesu. Teplota a iónové zloženie by nemali meniť pH ani tlmivú kapacitu.
Výber vhodnej vyrovnávacej pamäte
Zvolený pufor by mal mať pKa v rozsahu optimálnom pre študovaný proces. Tlmivý roztok s vyšším pKa je vhodný, ak je pravdepodobné, že počas experimentu dôjde k zvýšeniu pH, a naopak, ak sa očakáva pokles pH. Koncentrácie pufrov by sa mali optimalizovať, pretože koncentrácie vyššie ako 25 mM môžu mať lepšiu pufračnú kapacitu, ale môžu inhibovať bunkové aktivity, ako sú enzýmy. Metóda tiež určuje, ktorý buffer sa má použiť; napríklad v elektroforéze je vhodný pufor s nízkou iónovou silou, aby sa zabránilo zahrievaniu gélovej matrice.
Ako zmeniť pH tlmivého roztoku
Pretože sa pH môže meniť so zmenami teploty, vedci by mali testovať pH tlmivých roztokov pri teplote, pri ktorej budú experimentovať. Tris je pufer zvlášť náchylný na zmenu pH s teplotou. Všetky pH metre by mali byť kalibrované pri pracovnej teplote. Aditíva môžu tiež meniť pH, čo si vyžaduje opakované testovanie. Na zmenu pH sa pridá kyselina, obvykle kyselina chlorovodíková alebo báza, obvykle hydroxid sodný alebo draselný; malo by sa to robiť pomaly, aby sa zabránilo inaktivácii alebo chemickým zmenám v tlmivom roztoku.
Príklady biologických pufrov
TE pufor, ktorým je 10 mM Tris-HCl a 1 mM EDTA, je vhodný pri mnohých hodnotách pH na ukladanie nukleových kyselín. Elektroforéza je bežný spôsob štúdia proteínov alebo nukleových kyselín; tento proces používa množstvo tlmivých roztokov, vrátane tlmivých roztokov Tris-acetát-EDTA, Tris-glycín a Tris-borát-EDTA. Tieto tlmivé roztoky bránia zahrievaniu gélovej matrice a môžu obsahovať prísady, ako je močovina a SDS, v závislosti od vyšetrenia.