Obsah
Vedci používajú sériové riedenia (séria riedení 1:10) na výpočet hustoty obyvateľstva bakteriálnych kultúr. Keď sa naočkuje a inkubuje kvapka kultúry obsahujúca malý počet baktérií, každá bunka bude teoreticky dosť ďaleko od ostatných buniek, aby vytvorila svoju vlastnú kolóniu. (V skutočnosti môžu byť niektoré kolónie potomkami dvoch blízkych buniek, ale to je zriedkavé v zriedených kultúrach, a tak počet kolónií je veľmi dobrý odhad počtu buniek pôvodne prenesených na platňu.) Pretože hustota obyvateľstva je nie je známe, musí sa použiť celý rad riedení, aby sa skončila s jednou platňou s príslušným počtom kolónií.
Sériové riedenia
Označte šesť skúmaviek (každá obsahujúcich 9 ml rastového média) ako 1 až 6. Označte šesť agarových doštičiek ako 1 až 6. Na prenos 1 ml bakteriálnej kultúry do skúmavky použite pipetu a sterilné špičky pipety s objemom 1 mililitra (ml). 1.
Dobre premiešajte a preneste 1 ml z skúmavky 1 do skúmavky 2 pomocou pipety a sterilných špičiek 1 ml.
Opakujte krok 2 pre zostávajúce skúmavky, zakaždým, keď preneste 1 ml z naposledy použitej skúmavky do nasledujúcej skúmavky.
Na prenesenie 0,1 ml z skúmavky 1 na doštičku s agarom použite pipetu a sterilné hroty 0,1 ml. Plameňovú sklenenú tyč v tvare písmena L použite na rovnomerné rozloženie kvapky okolo dosky. Platňa sa inkubuje 48 hodín pri vhodnej teplote pre použité baktérie. Rôzne typy baktérií majú rôzne optimálne teploty rastu. Ak nemôžete nájsť optimálnu rastovú teplotu pomocou referenčného materiálu, skúste doštičky inkubovať pri 25 a 37 stupňoch.
Krok 4 zopakujte vždy, keď sa kvapalina prenesie z inej skúmavky na zodpovedajúcu doštičku.
Výpočty obyvateľstva
Pozorujte šesť platní a vyberte platňu s 30 až 200 izolovanými kolóniami.
Vynásobte počet kolónií na platni 10, aby ste vypočítali počet buniek na ml kultúry z použitej riediacej skúmavky.
Vynásobte číslo z kroku 2 10 ^ (počet platní), aby ste vypočítali počet buniek na ml pôvodnej kultúry. Hodnota 10 ^ (číslo doštičky) je zrieďovací faktor kultúry použitej na naočkovanie tejto doštičky.