Obsah
HPLC ponúka rýchlu, automatizovanú a vysoko presnú metódu na identifikáciu určitých chemických zložiek vo vzorke, ale môže byť nákladná, zložitá a nemusí fungovať pre všetky vzorky. Lekárske, forenzné, environmentálne a výrobné laboratóriá používajú túto techniku na kvantifikáciu a separáciu chemikálií vo vzorke. HPLC má v porovnaní s inými technikami výhody aj nevýhody.
HPLC a podobné techniky
Podobne ako iné formy chromatografie, aj HPLC umožňuje separáciu chemických zložiek pomocou mobilnej fázy a stacionárnej fázy. Mobilná fáza je kvapalná a stacionárna fáza je tuhá. Pretože sa rôzne komponenty pohybujú rôznymi rýchlosťami, navzájom sa od seba oddeľujú. Medzi alternatívne techniky patrí kapilárna elektroforéza, pri ktorej látky migrujú prostredníctvom roztokov v elektrickom poli a ďalšie chromatografické metódy, ako je extrakcia na pevnej fáze, plynová chromatografia a chromatografia na tenkej vrstve.
Rýchlosť, efektívnosť a presnosť
V porovnaní s inými chromatografickými technikami, ako je TLC, je HPLC mimoriadne rýchla a účinná. Používa skôr čerpadlo, ako gravitáciu, na vynútenie kvapalného rozpúšťadla cez pevný adsorbčný materiál, pričom sa rôzne chemické zložky oddeľujú pri pohybe rôznymi rýchlosťami. Proces môže byť dokončený približne za 10 až 30 minút a poskytuje vysoké rozlíšenie. Je presný a vysoko reprodukovateľný. Pretože je do značnej miery automatizovaný, základné HPLC testy sa môžu vykonávať s minimálnym zaškolením.
Náklady a zložitosť
Napriek svojim výhodám môže byť HPLC nákladná a vyžaduje veľké množstvá drahých organických látok. Techniky, ako je extrakcia v tuhej fáze a kapilárna elektroforéza, môžu byť lacnejšie a dokonca rýchlejšie, najmä pre analýzu pri správnej výrobnej praxi. Aj keď je použitie súčasných metód HPLC relatívne ľahké, riešenie problémov alebo vývoj nových metód môže byť zložité. Je to hlavne kvôli množstvu rôznych modulov, stĺpcov a mobilných fáz.
Citlivosť a rozlíšenie
Vo všeobecnosti je HPLC univerzálna a mimoriadne presná, pokiaľ ide o identifikáciu a kvantifikáciu chemických zložiek. Pri mnohých krokoch je presnosť HPLC do značnej miery závislá od procesu, ktorý je automatizovaný, a preto je vysoko reprodukovateľný. HPLC má pre niektoré zlúčeniny nízku citlivosť a niektoré sa nedajú zistiť, pretože sú ireverzibilne adsorbované. Prchavé látky sa lepšie oddelia plynovou chromatografiou.