Obsah
Escherichia coli, E. coli, je baktéria, ktorá rastie v dolnom čreve cicavcov. Tieto baktérie boli prvýkrát objavené na konci 18. storočia. Odvtedy má dlhú históriu použitia vo vedeckom výskume. Je to najpoužívanejší organizmus v molekulárnej genetike. Jedným z dôvodov, prečo sa E. coli bežne používa vo vedeckom výskume, je to, že je ľahké pestovať v laboratóriu. Faktory, ktoré uľahčujú rast E. coli, sú jej jednoduché výživové potreby, rýchly rast a mierne požiadavky na údržbu.
Inokulačnú slučku sterilizujte tak, že ju vložíte do plameňa Bunsenovho horáka. Dolná polovica slučky prechádza plameňom, kým nezačne svietiť načerveno.
Nechajte slučku vychladnúť. Môžete sa ho dotknúť sterilného agaru na platni, aby ste sa uistili, že vychladol. Po sterilizácii neumiestňujte slučku na stôl a nenechajte ju v kontakte s ničím iným ako sterilným agarom alebo požadovanou kultúrou.
Slučku ponorte do kultúry E. coli a potom ju vyberte.
Otvorte agarovú platňu a jemne kĺzajte slučkou tam a späť cez povrch jednej časti agaru. Dajte pozor, aby ste nepoškodili slučku na agare. Agar poskytuje živiny, ktoré potrebuje E. coli na rast.
Vložte slučku do plameňa horáka Bunsen znova, aby ste ju sterilizovali. Po vychladnutí slučkovej tyčinky sa dotknite sterilnej časti doštičky, aby ste sa uistili, že je chladná, potom posuňte slučku cez prvý pruh a urobte druhý pruh. Tento druhý pruh je zriedenou verziou prvého pruhu. Tento proces sterilizácie a kĺzania opakujte dovtedy, kým neprekĺzne niekoľko častí agarovej platne. Dôvodom je to, že si neskôr môžete vybrať z jednotlivých klonálnych kolónií. Pomôže to zaistiť, aby ste mali aspoň jednu časť, ktorá má jednotlivé kolónie - nie príliš koncentrované (čo bude mať príliš veľký rast a nedovolí vám vybrať si z jednej kolónie) a nie príliš zriedené (čo by nedalo kolónie) ,
Sterilizujte slučku v plameni ešte raz a potom ju odložte nabok do pracovnej oblasti.
Hornú časť vložte späť na platňu s agarom. Doska otočte hore nohami a vložte ju do inkubátora nastaveného na 37 stupňov Celzia (98,6 stupňov Fahrenheita). Táto ideálna inkubačná teplota simuluje teplotu ľudského tela, kde sídli E. coli. Do 24 až 48 hodín sa na agarovej platni objavia viditeľné kolónie baktérií E. coli.