Obsah
Aj keď ich nemožno vidieť voľným okom, baktérie sú všade. Existujú v potravinách, pôde, vode, povrchoch v našich domovoch a na našich telách. Baktérie sa zvyčajne vyskytujú v zmiešaných populáciách. Izolácia špecifickej baktérie od iných bakteriálnych druhov v danej vzorke umožňuje mikrobiológom študovať jej štruktúru a funkciu, vlastnosti použité pri jej identifikácii. Mikrobiológovia často izolujú baktérie pomocou jednej z niekoľkých techník pruhových doštičiek.
náradie
Na prenos mikroorganizmov sa používa očkovacia slučka. Skladá sa z nichrómového alebo platinového drôtu s malou kruhovou slučkou na jednom konci. Druhý koniec je rovný a zasúva sa do rukoväte. K dispozícii sú tiež plastové očkovacie očká na jedno použitie. Baktérie sa dajú izolovať iba vtedy, ak rastú. Mikrobiológovia pestujú baktérie na izoláciu pruhov doštičiek v plytkých okrúhlych Petriho miskách naplnených pevným médiom nazývaným agar. Agar napodobňuje prostredie, v ktorom baktérie prirodzene rastú. Misky naplnené médiom sú sterilné a zakryté, aby sa zabránilo rastu nežiaducich organizmov. Počas izolácie pruhovej doštičky sa inokulačná slučka opakovane sterilizuje v plameni Bunsenovho horáka.
zásada
Technika pruhových doštičiek je najpopulárnejšou metódou na izoláciu špecifických baktérií zo vzorky obsahujúcej zmes mikroorganizmov. Táto technika v zásade riedi počet organizmov a znižuje ich hustotu. Umožňuje mikrobiológom rozlíšiť a izolovať jednotlivé bakteriálne kolónie. Kolónia je viditeľným zhlukom baktérií. Všetky baktérie v jednej kolónii pochádzajú z rovnakej bakteriálnej bunky. V dôsledku toho sú jednotlivé kolónie „čistými“ kolóniami. Čistá kolónia sa prenesie na ďalšiu doštičku za vzniku čistej kultúry pozostávajúcej z jedného typu baktérií.
procedúra
Ak sa to urobí správne, izolácia pruhovaných doštičiek tenkou vzorkou steká a umožňuje jednotlivým bakteriálnym bunkám vyvinúť sa do izolovaných kolónií. Mikrobiológ začína sterilizáciou očkovacej slučky v ohni. Ochladí slučku tak, že sa dotkne agaru, potom ponorí slučku do vzorky a roztiahne ju tam a späť, aby zakryla časť platne. Sterilizuje slučku, ochladzuje ju a inokuluje druhú priľahlú časť doštičky niekoľkokrát pretiahnutím slučky cez prvú časť a zakrytím druhej časti pomocou kľukatého pohybu. Týmto sa zachytí malé množstvo baktérií z prvej sekcie a prenesie sa do druhej sekcie. Počet opakovaní tohto základného postupu závisí od použitej metódy pruhových doštičiek. Napriek tejto metóde sa pôvodná vzorka používa iba na naočkovanie prvej časti doštičky.
Metóda pruhových doštičiek
Metódy pruhových doštičiek sa líšia podľa počtu pruhov agaru. Metóda pruhu T používa tri sekcie: hornú polovicu a dve rovnako veľké spodné sekcie. Počiatočné inokulum sa umiestni do hornej polovice platne. Baktérie sa pretiahnu z hornej sekcie do jednej zo spodných sekcií a potom z tejto spodnej sekcie do druhej. Pri kvadrante sa pruhujú štyri rovnako veľké časti. Metóda kontinuálneho pruhovania typicky zahrnuje naočkovanie hornej polovice doštičky, jej otočenie o 180 stupňov a naočkovanie druhej polovice doštičky bez sterilizácie slučky alebo potiahnutia baktérií z predchádzajúcej časti.