Enzým je proteín, ktorý katalyzuje (zvyšuje rýchlosť) chemických reakcií. Optimálna teplota väčšiny enzýmov alebo teplota, pri ktorej enzýmy najlepšie uľahčujú reakcie, je medzi 35 a 40 stupňami Celzia. Zvýšenie teploty v tomto okne zvyšuje rýchlosť reakcie, pretože excituje molekuly a zvyšuje rýchlosť, pri ktorej sa enzýmy / reaktanty zrážajú a reagujú za vzniku produktu. Príliš vysoká teplota však môže enzým denaturovať a môže mu zabrániť, aby vôbec pracoval.
Stanovte optimálnu teplotu enzýmu zahrievaním reakcie pomocou nekonečného množstva a odoberaním malých vzoriek reakcie, aby ste určili, kedy nastane maximálna rýchlosť produkcie produktu.
Vyberte metódu. Zistite, ako budete merať koncentráciu svojho produktu v rôznych bodoch experimentu. Napríklad môžete merať koncentráciu mnohých produktov pomocou spektrofotometra a vypočítavať koncentráciu z absorbancie alebo meraním fluorescencie a vypočítaním koncentrácie z fluorescencie.
Nastavte experiment. Vložte reaktanty a enzýmy do malej nádoby s vekom, ako je napríklad scintilačná liekovka. Začne sa reakcia. Scintilačnú liekovku umiestnite do väčšej kadičky s vodou s izbovou teplotou. Kadičku položte na vyhrievaciu platňu. Do kadičky vložte teplomer. To vám umožní zmerať teplotu reakcie v rôznych bodoch.
Odoberte 100 μl reakčnej zmesi pri izbovej teplote, približne 25 stupňov Celzia. Zapnite vyhrievaciu dosku. Pri rôznych teplotách od 30 do 40 stupňov Celzia (30,5, 31, 31,5 atď.) Odoberte 100 mikrolitrových vzoriek vašej reakcie.
Určite koncentráciu svojho produktu pri každej teplote. Keď teplota stúpne nad 40 stupňov Celzia, uvidíte pokles rýchlosti premeny substrátu na produkt, pretože enzým je denaturovaný. Bod, v ktorom sa produkt vyrába maximálnou rýchlosťou, je bod, v ktorom je teplota optimálna.