Obsah
- Svetelná mikroskopia a bunková biológia
- Boli vyvinuté desiatky experimentálnych postupov
- Chemické škvrny a svetelná mikroskopia
- Ľahké priblíženie
- Výhody fluorescenčnej mikroskopie
- Nevýhoda svetelných mikroskopov
Svetelný alebo zložený mikroskop je nástroj, s ktorým sa pravdepodobne stretne každý študent biológie. Pochopenie výhod svetelného mikroskopu poskytne pohľad na zvládnutie jeho užitočnosti pre triedu alebo kliniku. Mnohé experimentálne techniky, ktoré boli zdokonalené na použitie so svetelným mikroskopom, ich ľahké použitie a relatívne nízka dostupnosť v porovnaní s inými typmi mikroskopov, z neho robia preferovanú voľbu pre mnohé aplikácie v oblasti biologických vied.
Svetelná mikroskopia a bunková biológia
Pretože bunky nie je možné prezerať bez pomoci oka, mikroskopia je kľúčovou súčasťou štúdia štruktúry a funkcie buniek. Svetelný mikroskop používa svetelný zdroj na osvetlenie vzorky na svetlom poli. Vzorka je zafarbená, aby vytvorili štruktúry, ktoré sú obvykle priesvitné alebo takmer bezfarebné, tmavšie ako pozadie a sú ľahšie viditeľné. Ďalšou mikroskopickou technikou je fluorescenčná mikroskopia. Namiesto použitia tmavého zafarbenia na svetlom pozadí sa bunky zafarbia fluorescenčnými farbivami a prezerajú sa na tmavom pozadí.
Boli vyvinuté desiatky experimentálnych postupov
Štúdium tkaniva svetelnou mikroskopiou sa praktizuje viac ako 50 rokov. Svetelná mikroskopia je najdostupnejšou formou mikroskopie na svete a stále je jedným z hlavných výcvikových nástrojov pre patológov alebo lekárov, ktorí diagnostikujú choroby skúmaním mikroskopickej štruktúry tkanív. Tisíce laboratórií na celom svete zdokonalili desiatky experimentálnych postupov a mnohé z nich sú voľne dostupné. Kombinácia nízkej ceny a veľkého množstva biologických informácií, ktoré poskytuje svetelný mikroskop, z neho robí neoceniteľný nástroj pre výskum a medicínu.
Chemické škvrny a svetelná mikroskopia
Pozorovanie vzorky pod svetelnou mikroskopiou vyžaduje pomoc farebných chemických škvŕn. Tieto modré, červené, zelené a hnedé škvrny sa fixujú na tkanive čistou chemikáliou zvanou permount, ktorá po vystavení vzduchu stvrdne. Kombináciou týchto chemických škvŕn a tkanív vydrží mnoho rokov bez vyblednutia, čo umožňuje vedcom skúmať ten istý preparát po dlhú dobu bez straty farby. Strata viditeľnosti je obmedzením fluorescenčnej mikroskopie, pretože fluorescenčné farbivá v priebehu času miznú.
Ľahké priblíženie
Schopnosť zloženého mikroskopu ľahko priblížiť pozorovanie chvosta malej ryby pri 50-násobku svojej skutočnej veľkosti k videniu tepien v jeho chvoste pri 400-násobku skutočnej veľkosti nie je porovnateľná s inými typmi mikroskopov. Patológovia skúmajú biopsie alebo malé kúsky tkaniva odstránené ihlou pod zloženým mikroskopom a často robia priblíženie a oddialenie, aby urobili čo najlepšie hodnotenie. Mikroskop zloženého svetla zostáva najlepšou voľbou pre tento typ výskumu.
Výhody fluorescenčnej mikroskopie
Fluorescenčná mikroskopia poskytuje divákovi väčšie vizuálne detaily, pretože fluorescenčné farbivá môžu zacieľovať na špecifické štruktúry v bunke. Fluorescenčné molekuly vo vzorke buniek nazývané fluorofory absorbujú svetlo pri jednej vlnovej dĺžke a vyžarujú svetlo s inou vlnovou dĺžkou. Fluorescenčné farbivá sa môžu použiť so špecifickými proteínmi a protilátkami na zvýraznenie štruktúr a dokonca jednotlivých molekúl v bunke. Fluorescenčné mikroskopické techniky umožňujú použitie viacerých farbív vo vzorke.
Nevýhoda svetelných mikroskopov
Mikroskopická technológia v posledných desaťročiach explodovala, niektoré pokročilejšie mikroskopy poskytujú podrobnejšie informácie ako klasický zložený (ľahký) mikroskop. Fluorescenčné mikroskopy umožňujú vedcom vidieť dva rôzne proteíny na rovnakom mieste v bunke pomocou červených a zelených markerov, ktoré sa prekrývajú a vytvárajú žltú farbu. Elektrónové mikroskopy ukazujú trojrozmerné vlastnosti povrchu buniek. Jednou z nevýhod svetelného mikroskopu je, že nemá niektoré z pokročilých schopností fluorescenčnej alebo elektrónovej mikroskopie, pretože využíva iba biele svetlo. Cena elektrónových mikroskopov a fluorescenčných mikroskopov sa však pohybuje v rozmedzí od desiatok tisícov po stovky tisíc dolárov, zatiaľ čo zložený mikroskop je v súčasnosti možné zakúpiť za pouhých 100 dolárov.