Obsah
Spektrofotometer sa používa na stanovenie koncentrácie určitých zlúčenín, ako je proteín, v roztoku. Svetlo obvykle prechádza cez kyvetu naplnenú vzorkou. Zmeria sa množstvo svetla absorbovaného vzorkou. Pretože zlúčeniny absorbujú svetlo v rôznych spektrálnych rozsahoch, musí sa pre analýzu nastaviť správna vlnová dĺžka. Existuje veľa spôsobov, ako vypočítať koncentráciu neznámych vzoriek pomocou spektrofotometrie, avšak použitie referenčných štandardov poskytuje najlepšiu presnosť. Normy ďalej označujú, či spektrofotometer nefunguje alebo má iné problémy s analýzou.
Výpočet pomocou rovníc priamky
Analyzujte referenčné štandardy na začiatku analýzy. Normy sú známe koncentrácie a používajú sa na kalibráciu zariadenia a kontrolu presnosti. Všetky vzorky by mali spadať do pracovného rozsahu noriem. Ak nie, bude potrebné vzorky zriediť alebo zvýšiť koncentráciu štandardov.
Vytvorte rozptylový graf alebo čiarový graf so štandardnými hodnotami koncentrácie a absorbancie. Koncentrácia bude na osi y, absorbancia na osi x. Napríklad štandardy sú 1 ppm, 2,5 ppm a 5 ppm. Uvádzaná absorbancia bola 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5 a 5 ppm = 0,75.
Naformátujte čiaru trendu tak, aby sa v grafe zobrazila rovnica. Rovnica zobrazí vzorec y = mx + b. Napríklad pri použití štandardov v kroku 2 je rovnica y = 0,1224x + 0,1531. Väčšina trendových čiar je zachytená na nule, ale záleží to na analytickej metóde a hodnote R na druhú.
Analyzujte neznáme vzorky a zaznamenajte hodnoty absorpcie.
Na určenie koncentrácie vzoriek použite rovnicu (y = mx + b).
Pochopenie rovnice priamky
Nech sa „Y“ rovná koncentrácii. To je to, čo sa vyrieši.
Nech sa „X“ rovná absorbancii vzorky. Toto je absorbancia meraná spektrofotometrom.
Nechajte „“, aby sa rovnal sklon a „b“, aby sa rovnal priesečníku y. Obidve sú uvedené, avšak ak bola trendová čiara vynútená cez 0, potom „b“ bude 0.
Vyriešte koncentráciu. Podľa príkladu v kroku 3 nahraďte „x“ ako danú nasiakavosť .563. Z tohto dôvodu:
y = 0,1224 (0,563) + 0,1531
y (koncentrácia) = 0,222011