Chemici používajú vysokoúčinnú kvapalinovú chromatografiu alebo HPLC na oddelenie zmesí zlúčenín. Všeobecne metóda spočíva v tom, že sa vzorka vstrekne do kolóny, kde sa zmieša s jedným alebo viacerými rozpúšťadlami. Rôzne zlúčeniny adsorbujú alebo „lepia“ na kolónu v rôznych stupňoch; a ako rozpúšťadlo tlačí zlúčeniny cez kolónu, jedna zo zložiek zmesi najskôr opúšťa kolónu. Prístroj deteguje zlúčeniny pri výstupe z kolóny a vytvára chromatogram, ktorý pozostáva z grafu s retenčným časom na osi x a intenzitou signálu z detektora na osi y. Keď zlúčeniny opúšťajú kolónu, vytvárajú na chromatograme „píky“. Všeobecne platí, že čím ďalej sú píky a užšie píky na chromatograme, tým vyššie je rozlíšenie. Vedci považujú rozlíšenie 1,0 alebo vyššie za adekvátne oddelenie.
Zmerajte šírky dvoch susedných píkov na chromatograme zaznamenaním, že hodnoty osi x sú na spodnej časti každého píku. Os x predstavuje retenčný čas, zvyčajne meraný v sekundách. Ak teda vrchol začína o 15,1 sekundy a končí o 18,5 sekundy, jeho šírka je (18,5 - 15,1) = 3,4 sekundy.
Stanovte retenčné časy zaznamenaním času, t. J. Polohy na osi x, ktorá zodpovedá umiestneniu maxima píkov. Táto hodnota bude normálne približne v polovici medzi dvoma hodnotami použitými na výpočet šírky v kroku 1. Napríklad príklad uvedený v kroku 1 by vykazoval maximum približne 16,8 sekundy.
Vypočítajte rozlíšenie R medzi dvoma vrcholmi pomocou
R = (RT1 - RT2) /,
kde RT1 a RT2 predstavujú retenčné časy píkov 1 a 2 a W1 a W2 predstavujú šírky píkov odobratých na ich základoch. Pokračovaním príkladu z krokov 2 a 3 vykazuje jeden pík retenčný čas 16,8 sekundy a šírku 3,4 sekundy. Ak by druhý pík vykazoval retenčný čas 21,4 sekundy so šírkou 3,6 sekundy, potom by bolo rozlíšenie
R = (21,4 - 16,8) / = 4,6 / 3,5 = 1,3.