Obsah
Biochémia študuje molekuly ako DNA, RNA a proteíny. Vedci používajú techniky blokovania na oddelenie týchto typov molekúl. V bunkách existujú ako zmes. Blotovanie umožňuje vedcom nájsť jeden proteín medzi mnohými, napríklad ihlu v kupce sena. Blotovanie sa všeobecne uskutočňuje nechaním zmesi DNA, RNA alebo proteínov prúdiť cez doštičku gélu. Tento gél umožňuje pohyb malých molekúl rýchlejšie ako tie väčšie. Oddelené molekuly sa potom pritlačia na membránu, ktorá pomáha presunúť molekuly z gélu na membránu. Molekuly sa držia membrány, ale zostávajú na rovnakom mieste, navzájom od seba, akoby boli stále v géli.
Western Blot
Western blotting je bežná technika na oddelenie proteínov podľa veľkosti, ale v priamych stĺpcoch. Tieto paralelné stĺpce umožňujú vedcom porovnávať množstvo bielkovín v rôznych vzorkách, ktoré sú vedené vedľa seba, napríklad bowlingové dráhy. Napríklad, ak ste testovali účinok rôznych množstiev liečiva na rast buniek, liečili by ste štyri rôzne skupiny buniek odlišným množstvom liečiva. Potom by ste mohli rozbiť bunky a spustiť proteíny každej skupiny v samostatných pruhoch na géli. Šírenie bielkovín týmto spôsobom vám umožní zistiť, čo zvyšuje koncentrácia liekov s určitým proteínom.
Northern Blot
Northern blotting sa používa na detekciu RNA. Bunky sa môžu rozlomiť, aby sa uvoľnila ich RNA. RNA z rôznych typov buniek sa môže prevádzkovať na samostatných dráhach na géli. Gél šíri rôzne RNA podľa veľkosti. Tieto elegantné paralelné rady RNA umožňujú výskumníkovi porovnať, ktorý typ bunky má, koľko RNA. Táto metóda umožňuje výskumníkovi určiť, či bunky určitého ochorenia majú viac alebo menej RNA. Northern blotting môže odhaliť, ako choroba pracuje na úrovni produkcie RNA.
Southern Blot
Southern blotting je originálna technika blotovania, ktorá začala pomenúvací systém. Vynašiel ho Edwin Southern. Southern blot sa používa na detekciu množstva DNA v zmesi. Rovnako ako pri proteínoch a RNA sa môže DNA bunky uvoľniť, keď sa táto bunka rozlomí. Southern blotting oddeľuje DNA od rôznych typov buniek podľa veľkosti. DNA z každej vzorky sa rozprestiera do čistých paralelných pruhov. Jednotlivé kusy DNA je možné detegovať pomocou rádioaktívnej alebo fluorescenčnej sondy, ktorá je navrhnutá tak, aby sa viazala iba na túto časť DNA. Energetický signál z rádioaktívnej sondy alebo záblesky svetla z fluorescenčného signálu hovoria vedcom, koľko z tejto časti DNA je v každej vzorke.
Iné bloty
Tri hlavné blotovacie techniky - západná, severná a južná - boli modifikované rôznymi spôsobmi, aby sa detegovali mierne odlišné molekuly. Napríklad Western blot vs Southern blot. detekuje proteín, respektíve DNA. Každá modifikovaná technika sa zvyčajne uskutočňuje obvyklým spôsobom, ale na detekciu molekuly, ktorá sa šíri do paralelných pruhov, sa používa iná metóda. Juhozápadné bloty detegujú molekuly proteínu prilepené na DNA. Severozápadné bloty detegujú molekuly proteínu prilepené k RNA. Farwestern bloty detekujú molekuly proteínu prilepené k iným proteínom.